水质**检验箱简介说明

用途：使用于师团在实验室或野外条件下进行水中**总数和和大肠菌群的检验。必要时还可进行水中肠道致病菌（沙门氏菌属和志贺菌属）的检验。

性能：本箱操作简便、检验快速、结果准确。其中，水中**总数的检验采用 膜——营养垫法。所用的培养基是新研制的无琼脂培养基。可获得与实验室条件下常规标准平板法同样的结果，水中大肠菌群的检验采用 膜——营养垫法。所用的培养基是新研制的改良远藤培养基，比普通的远藤氏培养基能获得更加满意的检验结果。尤其是对水中损伤大肠菌的检验有较好的效果，这样对**后水的检验能获得更加**可靠的结果；水中肠道致病菌——沙门氏菌属和志贺氏菌属的检验，采用常规和快速方法相结合。先用新研制的沙门氏菌属——志贺氏菌属通用增菌培养基增菌，然后用协同凝集试验法进行检验，24小时可初步报告结果，箱内还装有新研制的沙门菌属——志贺氏菌属选择培养基，必要市可进行常规检验，并可获得准确的检验结果。

整套装置由采样检验箱和选购部分-微型培养箱组成。可在野外或现场进行采样和检验，微型培养箱采用交、直流两用电源可在没有交流电条件下使用。

箱内的各种培养基忽然试验器材用完后可随时与亿通电子有限公司联系补充。

使用本检验箱时首先将箱内酒精灯装入酒精；酒精棉球瓶中装入75%浓度的酒精。

一、 采样检验箱内器材和药品

01、说明书1份

02、DY—II型移液管1支

03、DY—II型移液管吸嘴10支

04、接种棒1支

05、金属镊子1把

06、圆珠笔1支

07、特种红铅笔1支

08、塑料培养皿20付

09、营养肉汤培养基50管

10、改良远藤培养基50管

11、沙门似—志贺氏菌属增菌培养基20管

12、协同凝集试剂1套

13、沙门氏—志贺氏菌增菌瓶3个

14、改良SS选择琼脂1瓶

15、克氏双糖铁培养基1瓶

16、水样稀释瓶（50ml）1个

17、酒精棉球瓶1个

18、微孔 膜（35mm 0.45um） 3*100张

19、纸垫（47mm）7*40张

20、小杯（45-150ml）1个

21、酒精灯1付

22、塑料注射器（20ml）1付

23、**过滤器1套

24、小毛巾1条

25、火柴1盒

26、塑帽试管10支

二、 采样检验箱使用方法

1、 **中数检验方法

1. 1试验准备：

1.1. 1水样采集：采水容器事先**或使用前用被检水反复冲洗数次，然后采水。1.1.2移液管吸嘴的**：取下套在酒精灯上的支架，把支架小口端安装在酒精灯口上， 杯放在支架上，倒入适量水，把吸嘴放入 杯内，煮沸5-10分钟，备用。

1.2. 肉汤营养纸垫制备：

1.3. 1将小皿用酒精棉球擦拭**，晾干后每皿加一片纸垫。

1.2.2取肉汤安瓶一支倒人小杯内，加入15mi蒸馏水或自来水煮沸溶解即为营养肉汤。必要时。可以直接用开水冲泡溶解。

1.2.3取盛有纸垫小皿，每皿纸垫加营养肉汤1.8-2.5ml（液体充盈程度以不淹没滤膜为宜），即为肉汤营养垫，备用。

1. 3检验水样：

1**过滤器系统的组装；从检验箱中取出过滤器，将滤床 板端插入检验箱前侧箱壁与塑料板之间的夹缝内，把三通管带细塑料管一端插入滤器下面的孔内，三通管大孔端插入20ml注射器头下，接头处要严密。备用。

1.3.2**过滤器的处理：用燃着的酒精棉球擦拭**过滤器的滤床和漏斗，待凉后，取一片滤膜，放在滤床上，装上漏斗并拧紧。

1.3.3过滤水样：生活饮用水为1ml，平分两份，水源水可同时做原水1ml和稀释50倍（箱内50ml小瓶放入1ml被检水源水，家50ml冷开水或无菌水）1ml两个稀释度，水样加到滤器中后使之全部覆盖膜面，然后抽滤至水干，将阻菌滤膜面朝上贴于肉汤营养垫上。注意膜与营养垫之间不要有气泡。

1.4培养：37℃培养箱中培养24小时。

1.5菌落计数：计数膜上所有菌落数。

**总数计数方法：

**总数（个/ml）=膜上的平均菌落数*稀释倍数

1. 6注意事项：

1.6.1检验**总数过程中应尽量做到无菌操作。

1.6.2每检验完一个水样应用燃着的酒精棉球烧灼漏斗和滤床后，再进行检验**个样品。

1.6.3每次试验完毕，必须用干纱布把过滤漏斗和滤床等处擦干，以免腐蚀漏斗。

2、 大肠菌群检验方法：

2.1试验准备： 同**总数检验方法（1.1）

2.2远藤营养垫的制备：

2.2.1将小皿用酒精棉球擦拭**、晾干。每皿内加一片纸垫。

2.2.2取远藤培养基安瓶一支，倒人小杯内，从酒精棉球瓶内取出棉球挤压1-2滴酒精于培养基上使其刚好湿透，用玻棒搅匀，然后加15ml冷开水或蒸馏水，摇匀溶解即为远藤营养垫。

2.2.3取盛有纸垫培养皿，每皿纸垫加远藤培养液1.8-2.5ml（液体充盈程度以不淹没滤膜为宜），即为远藤营养垫。

2.3检验水样：

2.3.1**过滤器系统的组装： 同**总数（1.3.1）

2.3.2**过滤器系统的处理： 同**总数（1.3.2）

2.3.3过滤水样：生活饮用水，应检100-330ml，将被检水样倒入漏斗内至上刻度线处（100ml），检验330ml水量时，可过滤100ml后，再加100ml，直至滤完330ml，（如遇不易过滤水，可分2-3张膜过滤，分别贴于2-3个远藤应营养纸垫上，结果将膜上菌落数相加计算），将膜取下，小心贴于备用的远藤营养纸垫上。此时应注意勿使滤膜与营养垫之间留有气泡；检验未处理的水源水，取1ml水眼个，方法：同**总数，不同处仅把阻菌膜贴于远藤营养垫上。

2.4培养：37℃培养箱中，培养18-24小时。

2.5菌落计算： 计数膜上带有金属光泽或深黑色菌落。即为大肠菌数。

大肠菌群数计算方法：

大肠菌群数（个/升）=膜上菌落数*稀释倍数*1000

被检水样体积(ml)

2.6注意事项：同一水样，同时检验**总数和大肠菌群时，可不处理滤器；其它项同**总数(1.6)

3\水中肠道致病菌（沙门氏菌属和志贺氏菌属）检验方法：

3.1快速检验法：

3.1.1增菌培养：

3.1.1.1直接增菌法：吸取待检水样10ml放入增菌瓶中，加入一小管（0.44g）沙门氏菌—志贺氏菌通用增菌培养基，充分振摇搅拌使其溶解。然后置37℃培养箱培养24小时。

3.1.1.2浓缩增菌法：吸取待检水样100ml（更大或更小体积的水样，视水质而定）通过滤膜过滤，然后将阻菌滤膜取下，放入含有一小管（0.44g）沙门氏—志贺氏菌通用增菌培养基的10ml增菌液中（可用被检水或无菌蒸馏水配制增菌液）置37℃培养箱，培养24小时。

3.1.2协同凝集试验：具体步骤见“协同凝集试验方法”。不同种类的抗原液（即不同种类的沙门氏菌、志贺氏菌增菌后的菌悬液）分别用对应的凝集试剂进行协同凝集试验，根据凝集与否判断为阳性或阴性。

3.1.3协同凝集试验方法：

3.1.3.1取0.5ml生理盐水将协同凝集试剂溶解，用手摇匀。

3.1.3.2取1滴凝集试剂于载玻片上，加一滴抗原液（经增菌液培养24小时的水样），充份混匀，1-3分钟内观察结果。

3.1.3.3结果判断标准：

悬液完全透明，出现大量凝块和颗粒为++++

透明度稍差，出现大量凝块和颗粒为+++

悬液半透明，凝块和颗粒较少为++

悬液不透明，有少量颗粒为+

悬液浑浊，无颗粒出现为—

++以上为阳性，+为可疑。

对照：标准抗原作阳性对照

生理盐水作阴性对照

3.1.3.4注意：协同凝集试剂应置低温冷冻保存，有效期3年。

3.2常规检验方法：

3.2.1增菌培养：快速检验法中的直接增菌法和浓缩增菌法相同，其中志贺氏菌的增菌时间可以为16-18小时。

3.2.2平板分离：取上述经增菌的沙门氏菌、志贺氏菌培养液，用接种环化线接种改良SS选择琼脂平板，置37℃培养箱中培养24小时。（如使用其它选择培养基时，请注意对宋内氏痢疾杆菌是否良好，还是不生长或生长很差）。

3.2..3挑选菌落接种双糖管：每个平板挑取5个以上可疑肠道病原菌菌落，接种于双糖铁或三糖铁试管培养基中（将克氏双糖铁干燥培养基加水煮沸溶解后分装于塑帽试管中，3ml，高压蒸汽**或水浴100℃15分钟后放成高层斜面，凝固后即成）。置37℃培养箱中培养18-24小时。

附：沙门氏菌属和志贺菌属在改良SS选择琼脂平板上的菌落特征：

沙门氏菌属，菌落呈无色透明或半透明或中间有黑心，直径为1-3毫米（培养时间长时，有的菌落中心略呈微粉色，但与红色的大肠菌菌落完全不同）。

志贺氏菌属，菌落呈无色透明或半透明（宋氏痢疾杆菌的菌落中心有时略呈浅色），直径1-3毫米。

3.2..4生化反应及血清学检验：

沙门氏菌属：在双糖铁或三糖铁培养基上，底层变黄（分解葡萄糖产酸），产气或不产气（如伤寒沙门氏菌不产气），一般产H2S；斜面呈红色（不分解乳糖）。用沙门氏菌多价血清或单价抗血清进行凝集试验，根据凝集与否判断为阳性或阴性。

志贺氏菌属：在双糖铁或三糖铁培养基上，底层变黄（分解葡萄糖产酸），不产气，无动力，不产H2S；斜面呈红色（不分解乳糖）。用志贺氏菌多价血清或单价血清进行凝集试验，根据凝集与否判断为阳性或阴性。

中华人民共和国饮水卫生标准（**指标）

饮水类型	国标代号	**总数（个/1ml）	大肠菌数
生活饮用水	GB 5749-85	100	3个/1000ml
**战时饮用水	GJB 651-89	100	1个/100ml
饮用天然矿泉水	GB 8537-87	≤100	≤3个/1000ml